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Dissertation - Detailansicht
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Bibliografische Informationen
 miR-375 beim Merkelzellkarzinom, mehr als ein Serum-Biomarker.  
 Die Dysregulation von miRNAs ist bei allen bekannten Krebsarten zu finden und für die Karzinogenese, Metastasierung und das Behandlungsansprechen essentiell. Bestimmte Merkmale von miRNAs, wie die Zirkulation im Blut und die Stabilität, ermöglichen es ihnen, als Biomarker für die Diagnose, Prognose und Überwachung von Krebserkrankungen zu fungieren. Beim Merkelzellkarzinom (MCC), einem seltenen und aggressiven Hautkrebs, sind die Studien zu miRNAs eher begrenzt. Deshalb haben wir miRNA-Profiling in MCCs durchgeführt. miR-375 wurde als häufig vorkommende miRNA in klassischen MCC (cMCC) Zelllinien und Tumorgeweben identifiziert. Als nächstes zeigte das Vorhandensein von miR 375 in MCC-konditionierten Medien und Seren von zwei präklinischen MCC-Modellen, dass es wahrscheinlich als zirkulierende miRNA bei MCC-Patienten vorhanden ist. Tatsächlich unterscheiden sich miR-375-Serumspiegel zwischen MCC-Patienten mit und ohne Tumorlast, korrelieren mit dem MCC-Tumorstadium und dienen als wertvoller Marker für die MCC-Überwachung.
Als nächstes untersuchten wir die Funktionsweise der transkriptionellen Regulation von hochexprimierter miR-375 in MCCs. Der atonale BHLH-Transkriptionsfaktor 1 (ATOH1) gilt als abgeleiteter miR-375-Regulator. Die hohe Expression von ATOH1 wird in cMCC-Zelllinien und MCC-Geweben bestätigt und weist ein ähnliches Expressionsmuster wie miR 375 auf. Wir zeigen mittels Knockdown und Überexpression, dass ATOH1 der Induktor von miR-375 in MCC-Zellen und Fibroblasten ist. Interessanterweise induzieren die ektopische Expression von MCPyV LTs und ATOH1 ähnliche zellmorphologische Veränderungen, und die Expression von ATOH1 und miR-375 wird durch MCPyV LTs induziert.
Darüber hinaus untersuchten wir durch Knockdown mittels Antagomirs via Nukleofektion, die Rolle von miR-375 in MCC-Zellen. Der fast vollständige miR-375 Knockdown in cMCC-Zelllinien hat weder die Zellvitalität, noch die Zellmorphologie verändert. Zwei onkogene Signalwege, nämlich Hippo und EMT, die in MCC-Zellen durch miR-375 reguliert werden, wurden nur geringfügig verändert. Diese Beobachtungen machen miR-375 als intrazelluläres Onkogen in MCC-Zellen unwahrscheinlich.
Schließlich haben wir die Funktion von miR-375 in der interzellulären Signalübertragung untersucht, wobei wir uns auf die krebsassoziierte Fibroblasten-(CAF)-Polarisation konzentrierten. Exosomale MCC-abgeleitete miR-375 wurde auf Fibroblasten übertragen, die ihre Polarisation in Richtung CAF-Phänotyp, einschließlich einer erhöhten Expression von α-SMA, CXCL2 und IL-1β, verursacht. Die in der Kokultur induzierte Fibroblastenpolarisation wird durch miR-375 Antagomire gehemmt oder durch ektopische miR-375 Expression, die RBPJ und p53 beeinflusst, imitiert. Eine Reihe von in situ Beobachtungen aus MCC-Tumorproben stimmen mit unserer Hypothese überein. So liefern wir mehrere Beweislinien, dass die miR-375-Expression in MCC eine protumorigene Mikroumgebung erzeugt, indem sie eine Fibroblastenpolarisation induziert.
Zusammengefasst, zeigen wir in dieser Arbeit nicht nur, dass miR-375 als zirkulierender Serummarker für MCC dient, sondern erläutern auch die transkriptionelle Funktionsweise und Rolle in MCC-Zellen. Noch wichtiger ist, dass wir exosomale miR-375 aus MCC-Zellen zeigen, die Fibroblasten Richtung CAF-Phänotyp polarisieren.
 
 Merkelzellkarzinom; miR-375; Biomarker; Antagomire; krebsassoziierte Fibroblasten; ATOH1; MCPyV; Large T-Antigen; neuroendokrin; Exosomen; α-SMA; CXCL2; IL-1β; RBPJ; p53.  
 
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Autorinnen*Autoren / Co-Autorinnen*Co-Autoren
  Fan, Kaiji
Betreuende Einrichtung / Studium
  Universitätsklinik für Dermatologie und Venerologie
 UO 094 202 PhD-Studium (Doctor of Philosophy); Humanmedizin  
Betreuung / Beurteilung
  Heinemann, Akos; Univ.-Prof. Dr.med.univ.
  Zebisch, Armin; Assoz. Prof. Priv.-Doz. Dr.med.univ.
  Becker, Juergen; Prof. Dr. Dr.
  Schrama, David; Dr.