| Hintergrund: Die Kryokonservierung ist die Lagerungsmethode der Wahl für Stammzellen aus autologem peripheren Blut und allogenem Nabelschnurblut, welche für eine hämatologische Stammzelltransplantation verwendet werden sollen. Die Anzahl der hämatopoetischen Stammzellen (CD34+) korreliert mit der Geschwindigkeit des hämatologischen Engraftments. Das Überleben der Stammzellen kann von vielen Variablen im Prozess der Kryokonservierung und des Auftauens beeinflusst werden. Ziel der Studie war es, Einflüsse von Dimethylsulfoxid (DMSO), Temperatur und Inkubationszeit auf diverse hämatologische Zelltypen zu untersuchen. Nach unserem Wissensstand gibt es keinen allgemein akzeptierten Algorithmus für die Verarbeitung und Kurzzeit-Lagerung von kryokonservierten Stammzellen aus peripherem Blut nach dem Auftauen. Studiendesign und Methoden: Kryo-Röhrchen wurden in einem Wasserbad (37 °C) aufgetaut. Anschließend wurde DMSO vor (Protokoll I) oder nach (Protokoll II) einer Inkubations-Periode ausgewaschen. Die Proben wurden separat auf drei verschiedenen Temperaturniveaus (6 °C, 20 °C, 37 °C) inkubiert und nach bestimmten Wartezeiten (sofort bzw. nach 30, 60 und 120 min) auf Zellzahlen, Zellsubtypen (FACS), Überleben (Annexin V/PI) und Fähigkeit zur Repopulation (2nd CFU, LTC-IC) hin untersucht. Unterschiede wurden mit Hilfe einer 2-Weg Varianzanalyse auf statistische Signifikanz überprüft. Resultate: Zellzahlen von einigen T-Lymphozyten-Subtypen (CD3+, CD3+/4+, CD3+/8+) waren bei 20 °C und 37 °C erniedrigt, hauptsächlich wenn die Inkubation zusammen mit DMSO erfolgte, und ausgeprägter bei längerer Inkubation. Obwohl die Zahl der CD34+ Zellen nicht abnahm, sank die LTC-IC-Frequenz exzessiv nach Inkubation für 60 (II) bzw. 120 min (I) bei 37 °C. Schlussfolgerung: Diese Ergebnisse legen nahe, dass die Verarbeitung und Infusion von kryokonservierten Stammzellen aus peripherem Blut nach dem Auftauen nicht länger als 60 min dauern sollte, um Zellverluste zu vermeiden, und das Überleben von hämatologischen Stammzellen nicht zu gefährden. Sofortiges Auswaschen von DMSO reduziert zusätzlich die nachteiligen Effekte auf Zellzahlen und Repopulation. Aufgetaute Produkte sollten bei möglichst niedriger Tempe-ratur infundiert werden, und keinesfalls auf 37 °C aufgewärmt werden. |
