| Hintergrund: Der quantitative Nachweis von Cytomegalievirus (CMV) DNA mittels real-time PCR (qPCR) stellt die Standardmethode zur Frühdiagnose einer CMV-Infektion dar. Da eine weitere Verbesserung der qPCR-Technologie in naher Zukunft nicht zu erwarten ist, liegt der Schwerpunkt derzeit auf einer Optimierung der Nukleinsäurenextraktion.
Ziele: Evaluierung und Vergleich von Nukleinsäurenextraktionsautomaten unter Verwendung von verschiedenen Probenmaterialien (EDTA-Vollblut, Plasma, Urin, und bronchoalveoläre Lavage). Vergleich von den mit verschiedenen qPCR-Instrumenten erhaltenen Resultaten. Vergleich der gesamten Analysenzeit der verschiedenen Assaykombinationen.
Methoden: Es wurden 20 klinische Proben (jeweils 5mal EDTA-Vollblut, Plasma, Urin und bronchoalveoläre Lavage) von PatientInnen mit CMV-Infektion unter Verwendung von 4 verschiedenen automatisierten Extractionssystemen (easyMAG, QIAsymphony, MagNA Pure LC 2.0, VERSANT kPCR SP) analysiert. Die extrahierten Nukleinsäuren wurden mit 2 verschiedenen qPCR-Instrumenten, dem LightCycler 480 II und dem VERSANT kPCR AD, amplifiziert und detektiert.
Ergebnisse: Im Vergleich zu anderen Extraktionssystemen wurde mit dem VERSANT kPCR SP in Kombination mit dem VERSANT kPCR AD signifikant höhere Werte bei ETDA-Vollblut und Plasmaproben beobachtet (p<0.05). Der Vergleich der beiden Amplifikationssysteme ergab für den LightCycler 480 II signifikant höhere Werte bei der Mehrzahl der Proben. Die längste Analysenzeit wurde bei Verwendung des VERSANT kPCR SP beobachet.
Schlussfolgerung: Alle untersuchten Testkombinationen ergaben für die verwendeten Testmaterialien gute Ergebnisse innerhalb einer akzeptablen Analysenzeit. Es sollte immer beachtet werden, dass statistisch signifikante Ergebnisse nicht unbedingt klinisch relevant sein müssen. |
