| G-Protein aktivierte einwärtsgerichtete Kaliumkanäle (GIRKs) stellen eine Verbindung zwischen Membranpotentialen und der Präsenz von extrazellulären Signalmolekülen dar. Sie spielen eine bedeutende Rolle in der humoralen Regulation der Herzaktivität, der Insulinausschüttung des Pankreas oder auch der Neurotransmitter regulierten neuronalen Aktivität. Wie in den letzten Jahren bekannt wurde, haben GIRKs auch einen wesentlichen Einfluss auf die Pathophysiologie von Brustkrebs, bezüglich Proliferation und Metastasierung. Einige GIRK-Subtypen konnten bereits identifiziert und in kultivierten Brustkrebszelllinien, im Gegensatz zu benignen Brustepithelzellen, nachgewiesen werden.
Der Einfluss von GIRK1 und GIRK4 auf Morphologie und Vitalparameter von Brustkrebszellen wurde in der Brustkrebszelllinie MCF-7 untersucht. Da die Transfektion der GIRKs den grundlegendsten Schritt für solche Versuche darstellt, war es das Ziel dieser Arbeit, neue Zelllinien zu etablieren, welche das GIRK1-, bzw. GIRK4-Protein stabil exprimieren. Die Selektion der stabilen Transfektanten erfolgte mit dem Antibiotikum G-418 (Geneticin). Da die GIRK-Proteine mit der gelben Form des grünen Fluoreszenz-Proteins (eYFP) gekoppelt waren, konnte der Transfektionserfolg mittels Konfokalmikroskopie überprüft werden. Die Sortierung der stabil transfektierten Zellen wurde mittels FACS-Analyse (engl. fluorescence activated cell sorting) durchgeführt, wodurch sieben GIRK1-Klone (A-G) und fünf GIRK4-Klone (2-6) hervorgebracht wurden. Diese wurden anschließend morphologisch charakterisiert.
Die im Rahmen der transienten Transfektion ersichtliche subzelluläre Verteilung der Fluoreszenz, welche bei GIRK1 im Intrazellulärraum, und bei GIRK4 in der Zellmembran lokalisiert war, schien für das jeweilige Protein charakteristisch zu sein. Bei der konfokalmikroskopischen Untersuchung der gewonnen Klone zeigte sich allerdings, dass das Expressionsverhalten und das Wachstumsmuster der Zellen, vor allem bei stark exprimierenden Klonen verändert war. Weitere Experimente bezüglich Vitalparameter dieser Zelllinien sind geplant. |
