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Medizinische Universität Graz    

Meine Abschlussarbeiten - Publikationen

Diplomarbeit - Detailansicht
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Bibliografische Informationen
 Transfer und Aufnahme von sezernierter lysosomaler saurer Lipase  
 Die lysosomale saure Lipase (LAL) spielt eine entscheidende Rolle im intrazellulären Lipidstoffwechsel, indem sie Triacylglycerole und Cholesterinester zu freien Fettsäuren und freiem Cholesterin hydrolysiert. Ein genetisch bedingter Mangel an LAL führt zur lysosomalen Speicherung von Lipiden und manifestiert sich klinisch als lysosomale saure Lipase Defizienz (LAL-D). Diese Erkrankung umfasst ein Spektrum von Schweregraden, von der schweren Wolman-Krankheit bis hin zur milderen Cholesterinester-Speicherkrankheit.

In dieser Arbeit wurde der Transfer und die zelluläre Aufnahme von rekombinanter LAL in vitro untersucht, mit besonderem Fokus auf Makrophagen, sowohl als etablierte Zelllinien, sowie als primäre aus dem Knochenmark differenzierte Makrophagen (BMDM). Ziel war es, den Effekt einer experimentellen Enzymersatztherapie (ERT) durch die Gabe rekombinanter LAL-Proteine zu analysieren und deren enzymatische Aktivität und Wirksamkeit zur Normalisierung des Lipidstoffwechsels zu bestimmen.

Ich etablierte und validierte einen fluoreszenzbasierten Aktivitätsassay, der auf der Hydrolyse des Substrats 4-Methylumbelliferyl-palmitat beruht. Dabei verglich ich unterschiedliche Transfektionsmethoden, Zelllinien und Proteinpräparationen, um eine optimale Aufnahme und Aktivität der rekombinanten LAL zu gewährleisten. Darüber hinaus erfolgte die Analyse der intrazellulären Lokalisation mittels Immunfluoreszenz sowie die quantitative Bestimmung des Lipidprofils mittels Dünnschichtchromatographie.

Die Ergebnisse zeigten, dass rekombinante LAL von Makrophagen effizient aufgenommen wird und in Lysosomen lokalisiert wird, wo sie enzymatisch aktiv ist. In BMDM führt die Behandlung mit rekombinanter LAL zu einer signifikanten Reduktion der Lipidakkumulation, was die Eignung dieser Methode als potenzielle therapeutische Strategie bestätigt, einschließlich der bei LAL-D besonders stark betroffenen Makrophagen.

Zusammenfassend liefert die vorliegende Arbeit wichtige Erkenntnisse über die zelluläre Aufnahme, Aktivität und therapeutische Wirksamkeit rekombinanter LAL in Zellmodellen der LAL-Defizienz. Diese Daten tragen zur Entwicklung verbesserter Therapiestrategien für Patienten mit LAL-D bei.

 
 Lysosomale saure Lipase (LAL); Lipidstoffwechsel; Lipidstoffwechselstörung; Lipolyse; Enzymsubstitutionstherapie; Enzymtransfer; Zelluläre Aufnahme; Enzymsekretion Enzymaktivität  
 
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Autorinnen*Autoren / Co-Autorinnen*Co-Autoren
  Hein, Ronja
Betreuende Einrichtung / Studium
  Lehrstuhl für Molekularbiologie und Biochemie
 UO 202 Humanmedizin  
Betreuung / Beurteilung
  Kratky, Dagmar; Univ.-Prof. Mag. Dr.rer.nat.
  Schooltink, Laszlo; MSc